Agar Ziamniaczano Glukozowo Drożdżowy (PDYA - Potato Dextrose Yeast Agar)

Na zrobienie 1 litra potrzeba:

• 250 gram ziemniaków; Nie obieraj, wyszoruj, wycinając oczka i zepsute miejsca. Potnij w 2 cm kawałki.
• 20 gram agaru.
• 10 gram bezwodnej glukozy
• 1,5 gram ekstraktu drożdżowego

Pocięte ziemniaki wypłucz dwa razy pod kranem i odcedź oraz raz pod wodą destylowaną. Dodaj do nich litr destylowanej wody. Gotuj dopóki ziemniaki nie zmiękną. Wywar ziemniaczany przefiltruj przez dwie warstwy gazy. Zachowaj wywar a ziemniaki wyrzuć. Dodaj do wywaru destylowanej wody by otrzymać 1 litr. Zagotuj powstały litr wywaru. Mieszając powoli dodaj agar, glukozę oraz ekstrakt drożdżowy. Mieszaj póki się nie rozpuszczą, uważnie obserwuj by nie wykipiało.

Autoklawuj przez 15 minut w temperaturze 121°C.

Procedura laboratorium Penn State Spawn Lab na zrobienie PDYA

Wyszoruj do czysta ziemniaki, wycinając oczka i zepsute miejsca.





Potnij je w 2 cm kawałki i umieść w dużej kolbie pyrexowej.
Ziemniaki są płukane dwa razy pod kranem i raz wodą destylowaną.







Do kolby z ziemniakami wlej litr destylowanej wody.


Do drugiej kolby włóż 20 gram agaru i litr destylowanej wody.


Ugotuj ziemniaki i rozpuść agar umieszczając OTWARTE kolby na metalowej tacy i autoklawując je bezciśnieniowo 45 minut.
Bezciśnieniowo = 100°C przy 8 funtowym ciśnieniu.


W czasie gotowania odważ 10 gram glukozy i 1,5 gram ekstraktu drożdżowego.


Przygotuj jednolitrowy, plastikowy cylinder i szklany lejek wyłożony dwoma warstwami gazy.


Przefiltruj wywar ziemniaczany poprzez przelanie go przez gazę do cylindra.



Jeśli trzeba dodaj destylowaną wodę, by dopełnić objętość w cylindrze do jednego litra. Do kolby zawierającej rozpuszczony agar dodaj glukozę i ekstrakt drożdżowy, po czym zamieszaj kolbą. Zmieszaj wywar ziemniaczany z roztworem agaru poprzez czterokrotne przelanie ich z cylindra do kolby i z powrotem.


Jeśli robimy probówki pipetujemy na raz przy pomocy pipetara. Pamiętaj by po zakończeniu przemyć pipeter gorącą wodą.




Sterylizuj 15 minut w 121°C w opcji wolny wydech (Slow Exhaust).


Probówki powinny być umieszczone pod skosem na podstawce ukośnikującej "ukośnicy" dopóki nie zastygną, około 3 godziny.




PDYA do napełniania szalek: Umieść 500 ml PDYA w jednolitrowej kolbie; przykryj wlot dwoma arkuszami papieru filtracyjnego, owiniętego gumką i okrytego małą torbą papierową; Sterylizuj 15 minut w 121°C w opcji "Slow Exhaust"; Szalki mogą być napełniane jak tylko kolba ostygnie na tyle by można było ją dotknąć.

Wywar PDY: Wykonujemy w ten sam sposób pomijając agar.

Kwaśny PDYA: Dodaj 1 ml kwasu mlekowego do płynnego podłoża tuż przed napełnieniem szalek.