Agar PDYA

Vija L. Wilkinson
Research Support Technologist
Department of Plant Pathology

Agar Ziamniaczano dekstrozowo drożdżowy (PDYA - Potato Dextrose Yeast Agar)

Na zrobienie 1 litra potrzeba:

• 250 gram ziemniaków; Nie obieraj, wyszoruj, wycinając oczka i zepsute miejsca. Potnij w 2 cm kawałki.
• 20 gram agaru.
• 10 gram bezwodnej dekstrozy
• 1,5 gram ekstraktu drożdżowego

Pocięte ziemniaki wypłucz dwa razy pod kranem i odcedź oraz raz pod wodą destylowaną. Dodaj do nich litr destylowanej wody. Gotuj dopóki ziemniaki nie zmiękną. Wywar ziemniaczany przefiltruj przez dwie warstwy gazy. Zachowaj wywar a ziemniaki wyrzuć. Dodaj do wywaru destylowanej wody by otrzymać 1 litr. Zagotuj powstały litr wywaru. Mieszając powoli dodaj agar, dekstrozę oraz ekstrakt drożdżowy. Mieszaj póki się nie rozpuszczą, uważnie obserwuj by nie wykipiało.

Autoklawuj przez 15 minut w temperaturze 121°C.

Procedura laboratorium Penn State Spawn Lab na zrobienie PDYA
Wyszoruj do czysta ziemniaki, wycinając oczka i zepsute miejsca.






Potnij je w 2 cm kawałki i umieść w dużej kolbie pyrexowej.
Ziemniaki są płukane dwa razy pod kranem i raz wodą destylowaną.








Do kolby z ziemniakami wlej litr destylowanej wody.




Do drugiej kolby włóż 20 gram agaru i litr destylowanej wody.




Ugotuj ziemniaki i rozpuść agar umieszczając OTWARTE kolby na metalowej tacy i autoklawując je bezciśnieniowo 45 minut.
Bezciśnieniowo = 100°C przy 8 funtowym ciśnieniu.




W czasie gotowania odważ 10 gram dekstrozy i 1,5 gram ekstraktu drożdżowego.




Przygotuj jednolitrowy, plastikowy cylinder i szklany lejek wyłożony dwoma warstwami gazy.




Przefiltruj wywar ziemniaczany poprzez przelanie go przez gazę do cylindra.




Jeśli trzeba dodaj destylowaną wodę, by dopełnić objętość w cylindrze do jednego litra. Do kolby zawierającej rozpuszczony agar dodaj dekstrozę i ekstrakt drożdżowy, po czym zamieszaj kolbą. Zmieszaj wywar ziemniaczany z roztworem agaru poprzez czterokrotne przelanie ich z cylindra do kolby i z powrotem.


Jeśli robimy probówki pipetujemy na raz przy pomocy pipetara. Pamiętaj by po zakończeniu przemyć pipeter gorącą wodą.






Sterylizuj 15 minut w 121°C w opcji "Slow Exhaust".




Probówki powinny być umieszczone pod skosem na podstawce ukośnikującej "ukośnicy" dopóki nie zastygną, około 3 godziny.






PDYA do napełniania szalek: Umieść 500 ml PDYA w jednolitrowej kolbie; przykryj wlot dwoma arkuszami papieru filtrującego, owiniętego gumką i okrytego małą torbą papierową; Sterylizuj 15 minut w 121°C w opcji "Slow Exhaust"; Szalki mogą być napełniane jak tylko kolba ostygnie na tyle by można było ją dotknąć.





Wywar PDY: Wykonujemy w ten sam sposób pomijając agar.

Kwaśny PDYA: Dodaj 1 ml kwasu mlekowego do płynnego podłoża tuż przed napełnieniem szalek.

---

tłumaczenie: cjuchu